Gel ECM from Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma

Le gel ECM issu de sarcome d′Engelbreth-Holm-Swarm murin a été utilisé pour recouvrir des plaques de culture tissulaire destinées à différents sous‑types de gliomes et à des cellules musculaires C2C12. Il a également servi de structure de support afin d′améliorer la fixation, la maturation et la survie de myotubes.

Le gel ECM peut être utilisé avec des cellules épithéliales, des cellules endothéliales, des cellules musculaires, des cellules nerveuses et des cellules tumorales.

Le gel ECM subit une polymérisation activée par la chaleur lorsqu'il est porté à une température de 20 à 40 °C, formant alors une membrane basale reconstituée. Les cellules PC12 forment des neurites en 2 jours lorsqu'elles sont cultivées sur une fine couche de gel ECM.

Chaque colonie de souris servant à la production de ce produit est testée en routine à la recherche de plusieurs pathogènes. Produit testé et trouvé négatif pour le LDEV.

Ce produit est préparé à partir de sarcomes d′Engelbreth-Holm-Swarm de souris. Il est dialysé contre du chloroforme. Le gel doit être décongelé toute une nuit entre 2 et 8 °C avant emploi, puis disposé sur une plaque à puits en utilisant une plaque et des pipettes pré-refroidies entre 2 et 8 °C. Le gel peut contenir des précipités qui n′ont aucune incidence sur son activité. Le gel peut également être dilué jusqu′à deux fois à l′aide de milieu de Eagle modifié par Dulbecco entre 2 et 8 °C, avant dépôt sur la plaque. Le produit gélifie en 5 minutes à 20 °C. En cas de manipulations prolongées, il convient de travailler à une température inférieure à 10 °C. Les cellules peuvent être déposées sur les plaques à la surface d′une fine couche de gel de 0,5 mm ou mises en culture à l′intérieur d′une couche de 1 mm. Pour une culture selon la seconde option, ajouter les cellules au gel avant étalement sur la plaque en se basant sur une densité recommandée de 3 à 4 x 10⁴ cellules/ml. Pour dissocier les cellules de ce gel, utiliser une protéase dans du PBS sans calcium, magnésium ou EDTA, à une concentration de 0,6-2,4 unités/ml.

Le gel ECM a été préparé avec une concentration en protéines de 8 à 12 mg/ml et contient principalement de la laminine, plus du collagène de type IV, du protéoglycane de type sulfate d'héparine, de l′entactine ainsi que d′autres constituants mineurs. L′ajout de collagène de type IV au gel ECM augmente la polymérisation.
La modification de la réduction des facteurs de croissance permet un meilleur contrôle du milieu, une meilleure interprétation des résultats et une plus grande polymérisation. Le milieu est également exempt de rouge de phénol, qui peut interférer avec certaines analyses.

Pour un stockage à long terme, garder le produit à -20 °C. Le gel ECM peut être conservé entre 2 et 8 °C jusqu'à 72 heures.