Désoxyribonucléase I from bovine pancreas

La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a été utilisée dans une étude sur une nouvelle technique d'obtention de RNase, de DNase, de cholestérolestérase et de trypsine hautement actives à partir de pancréas de bovin. La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a également été utilisée dans une étude portant sur l'isolement puis la caractérisation de DNase de foie de carpe.

Produit utilisé pour éliminer l'ADN présent dans les échantillons de protéines.

La DNAse I de Sigma a été comparée à un inhibiteur de l'interleukine 1 dérivé d'urine humaine quant à leur capacité à hydrolyser l'ADN[¹⁴C]. Elle a également été utilisée pour cliver un fragment de restriction Hind III/Nci I de 139 paires de bases afin d'étudier sa stabilité dans des expériences de footprinting. La DNase I est très utilisée comme agent de footprinting pour l'étude de la liaison de médicaments et de protéines à l'ADN.

La DNase I est une endonucléase qui agit sur les liaisons phosphodiester adjacentes à des pyrimidines et qui produit des polynucléotides ayant des groupements 5′-phosphate terminaux. En présence de Mg²⁺, la DNase I clive indépendamment chaque brin d'ADN et les sites de clivage sont aléatoires. Les deux brins d'ADN sont clivés approximativement au niveau du même site en présence de Mn²⁺. Le pH optimal se situe entre 7 et 8. Les cations divalents tels que Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ et Zn²⁺ sont des activateurs de cette enzyme. Une concentration en Ca²⁺ de 5 mM la stabilise vis-à-vis de la digestion protéolytique. La DNase I de pancréas de bovin est constituée de quatre éléments, A, B, C et D, qui peuvent être distingués par chromatographie. Le rapport molaire des éléments A, B et C est de respectivement 4:1:1. L'élément D est présent en très faible quantité. Le 2-mercaptoéthanol, les chélateurs, le dodécylsulfate de sodium (SDS) et l'actine sont connus pour inhiber l'activité de cette enzyme.

Poudre lyophilisée contenant du chlorure de calcium

La poudre d'enzyme peut être reconstituée dans de l'eau ou tout tampon de pH 4,0 à 9,0, à l'exception des tampons phosphates. Les chélateurs de calcium doivent être évités. Une solution de DNase I à 10 mg/ml dans du NaCl 0,15 M peut perdre < 10 % de son activité lorsqu'elle est conservée une semaine en aliquotes à −20 °C. La perte d'activité peut être d'environ 20 % si la même solution est conservée en aliquotes entre 2 et 8 °C. Elle reste active pendant 5 heures maximum à 60 °C entre pH 5 et pH 7 et devient inactive après moins de 10 minutes à 68 °C. Sa perte d'activité est de 6 % par heure dans un tampon acétate (pH 5,0) ou un tampon Tris (pH 7,2) à une concentration de 1 mg/ml.

Protéine déterminée par la réaction du biuret.

Une unité Kunitz produit une ΔA₂₆₀ de 0,001 par minute et par millilitre, à pH 5,0 et à 25 °C, avec de l'ADN de type I ou III comme substrat. (1 unité = 1 unité Kunitz)