Base azotée pour levures sans acides aminés

La Base azotée pour levures est considérée comme un produit idéal pour la culture de levures de type sauvage. La présence d′acides aminés est connue pour empêcher l′utilisation de marqueurs sélectionnables. C′est la raison pour laquelle ce milieu est formulé sans acides aminés et peut être utilisé pour le clonage et la manipulation de chromosome artificiel de levure.

La base azotée pour levures est un milieu de croissance de référence pour la culture des levures. Ce bouillon microbien riche en nutriments contient de l'azote, des vitamines, des oligoéléments et des sels.

La Base azotée pour levures sans acides aminés a été utilisée :

• Dans des milieux de supplément complet (SC)-Leu synthétiques destinés à la culture et à la caractérisation de Y. lipolytica.
• Comme constituant de milieux liquides sélectifs pour la croissance auxothrophique pour l′uracile de levures.
• Pour évaluer l′efficacité de transformation de souches de S. cerevisiae dans diverses conditions de nutriments.

Produit utilisable pour la classification des levures selon leurs besoins en acides aminés et en carbone. Il peut s'avérer nécessaire d'ajouter des acides aminés et une source de carbone (glucose, en général).

1. Préparer une solution mère concentrée 10 × en mettant en suspension 6,7 g de base azotée pour levures, 5 g de glucose, ou une quantité équivalente d'un autre sucre, et 5 à 10 mg de l'acide aminé souhaité dans 100 ml d'eau distillée.
2. Chauffer si nécessaire pour faciliter la dissolution, puis stériliser par filtration.
Conserver la solution mère concentrée 10 × à une température de 2 °C à 8 °C. Avant utilisation, diluer à 1:10 dans de l'eau distillée stérile en conditions aseptiques.

Composé, quantité (μg/l, sauf indication contraire)

Sources d′azote :
Sulfate d'ammonium - 5,0 g/l

Vitamines :
Biotine - 2,0
Pantothénate de calcium - 400
Acide folique - 2,0
Inositol, 2,0 mg/l
Acide nicotinique - 400
Acide p-aminobenzoïque - 200
Pyridoxine HCl - 400
Riboflavine - 200
Thiamine HCL - 400

Éléments traces :
Acide borique - 500
Sulfate de cuivre - 40
Iodure de potassium - 100
Chlorure ferrique - 200
Sulfate de manganèse - 400
Molybdate de sodium -200
Sulfate de zinc - 400

Sels :
Phosphate monobasique de potassium - 1,0 g/l
Sulfate de magnésium - 0,5 g/l
Chlorure de sodium - 0,1 g/l
Chlorure de calcium - 0,1 g/l