Inhibiteur de trypsine from Glycine max (soybean)

Cet inhibiteur agit contre la trypsine ; il présente une activité réduite envers la chymotrypsine et la plasmine. Il inhibe également les protéases dont le mécanisme est similaire à celui de la trypsine, la kallikréine plasmatique et le facteur de coagulation X. L′inhibiteur de trypsine n′agit pas contre les métalloprotéases, les kallikréines tissulaires, les protéases acides ou les thio-protéases. Cet inhibiteur agit en formant un complexe d′une façon stœchiométrique 1 à 1 avec le site actif de la protéase, suivi du clivage d′une seule liaison arginine-isoleucine présente dans l′inhibiteur. L′inhibition est réversible et dépendante du pH.

L′inhibiteur de trypsine est soluble dans l′eau et les tampons phosphate à 10 mg/ml. Il est soluble dans des solutions salines équilibrées à 1 mg/ml et dans les milieux sans sérum. Les solutions d′une concentration supérieure à 10 mg/ml peuvent être troubles et de couleur jaune à ambrée. Après le traitement des cellules à la trypsine, les resuspendre dans une solution d′inhibiteur de trypsine à 1 mg/ml pour chaque ml de solution de trypsine utilisée pour la dissociation. La suspension cellulaire doit alors être centrifugée à 1000 tr/min pour former un culot de cellules.

Les solutions maintiennent leur activité lorsqu′elles sont conservées à court terme entre 2 et 8 °C. Les solutions sont stables en aliquotes congelés à -20 °C.

Une unité de trypsine produit une A₂₅₃ de 0,001 par minute avec l′ester éthylique de N-alpha-benzoyl-L-arginine (BAEE) comme substrat à pH 7,6 et 25 °C.

1 U corresponds to the amount of inhibitor which reduces the trypsin activity by 1 BAEE-U. (1 BAEE-U is the amount of enzyme which increases the absorbance at 253 nm by 0.001 per minute at pH 7.6 and 25 °C; BAEE, Cat. No. 12880, as substrate).

For the inhibition of proteolytic activity; Use in affinity chromatography for the purification of trypsin; Prepared by the method of M. Kunitz.