Protéinase K from Tritirachium album

Il s′agit d′une sérine protéase qui présente une forte activité protéolytique sur un grand nombre de protéines natives et dénaturées de haut poids moléculaire. Du fait de son inactivation protéolytique rapide des nucléases endogènes, elle peut être utilisée pour l′isolement d′ARNm et d′ADN de haut poids moléculaire. Elle clive préférentiellement les liaisons voisines du groupe carbonyle des acides aminés hydrophobes N-substitués, aliphatiques et aromatiques. Elle est inhibée par le DFP, Hg²⁺ et le PMSF. Elle n′est pas inactivée par les chélateurs de métaux, les réactifs sulfhydrylés, le TLCK ou le TPCK.

Utile pour l′inactivation protéolytique des nucléases lors de l′isolement de l′ADN et de l′ARN.

Utile pour l′inactivation protéolytique des nucléases lors de l′isolement de l′ADN et de l′ARN.
Élimine les endotoxines qui se lient aux protéines cationiques telles que le lysozyme et la ribonucléase A.
S′est avéré utile pour l′isolement des mitochondries hépatiques, de levure et de haricot mungo.
Détermination de la localisation des enzymes sur les membranes.
Traitement des coupes de tissus incluses en paraffine pour exposer les sites de liaison à l′antigène pour le marquage par anticorps.
Digestion des protéines des échantillons de tissu cérébral pour la recherche sur les prions responsables des encéphalopathies spongiformes transmissibles (EST).

La protéinase K est une sérine protéase très stable et hautement réactive. Des études de cristallographie et de structure moléculaires ont indiqué que cette enzyme appartient à la famille des subtilisines, présentant une triade catalytique au site actif (Asp³⁹-His⁶⁹-Ser²²⁴). Elle est stable dans un vaste éventail d′environnements : pH, sels de tampon, détergents (SDS) et température. En présence de 0,1 à 0,5 % de SDS, la protéinase K reste active et peut digérer diverses protéines et nucléases dans les préparations d′ADN, sans compromettre l′intégrité de l′ADN isolé.

Produit lyophilisé à partir de l'acétate de calcium

Après reconstitution, conserver au réfrigérateur (à 4 °C). Les solutions mères préparées dans du Tris-HCl 50 mM avec de l'acétate de calcium 2 mM et à pH 8,0 sont stables jusqu'à 1 an à 4 °C.

Une unité mAnson est définie comme la quantité d'enzyme permettant de libérer 1,0 µmol d'acides aminés sensibles au réactif de Folin (quantité calculée sous forme de tyrosine) par minute à 37 °C et pH 7,5.

Watazu, Y., et al. 1993. J. Lab. Clin. Anal. 7, 81.
Lebherz, H.G., et al. 1986. Biochem. J.233, 51.
Ebeling, W., et al. 1974. Eur. J. Biochem.47, 91.

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Toxicité : irritant (B)