JumpStart^™ Taq ReadyMix avec SYBR^® Green^™

Le colorant SYBR^® Green I convient parfaitement à la quantification de tout type de séquence d'ADN. Il se fixe à l'ADN double brin et la détection est réalisée par la mesure de l'augmentation de la fluorescence au fur et à mesure des cycles.

Le mélange maître JumpStart^™ Taq ReadyMix^™ avec SYBR^® Green allie les performances de l'anticorps anti-Taq JumpSart^™ pour PCR à démarrage à chaud avec détection au SYBR^® Green I, et la simplicité d'utilisation d'une solution ReadyMix^™. Ce mélange prêt à l'emploi, composé de colorant SYBR^® Green I, de Taq polymérase JumpStart^™, de désoxynucléotides purs à 99 % et d'un tampon de réaction, se présente sous la forme d'une solution concentrée 2 × pour une plus grande facilité d'utilisation. Il suffit d'ajouter 25 μl de la solution concentrée 2× à un mélange contenant la matrice d'ADN et les amorces dans de l'eau. L'anticorps anti-Taq JumpSart^™ inactive l'ADN polymérase à température ambiante. Lorsque la température passe au-dessus de 70 °C pendant la première étape de dénaturation du thermocyclage, le complexe se dissocie et la polymérase devient totalement active. La Taq ADN polymérase JumpStart^™ empêche les amplifications non spécifiques, ce qui améliore la précision des valeurs de C_T.

JumpStart^™ Taq ReadyMix^™ avec SYBR^® Green a été utilisé :

• en PCR quantitative (qPCR) pour amplifier une zone unique de conservation parmi tous les variants des gènes de la protéine basique de la myéline (mbp), de SRY-Box 10 (sox10) et de la β-actine.
• en PCR quantitative en temps réel pour détecter l'accumulation du produit de PCR lors de chaque cycle d'amplification.
• lors d'amplifications par qPCR de routine d'une matrice d'ADN et d'une matrice d'ADNc.
• pour amplifier de l'ARN par PCR quantitative en temps réel après transcription inverse (qRT-PCR).

JumpStart Taq ReadyMix avec SYBR Green est recommandé pour les expériences d′amplification en temps réel de produit unique, et peut également servir à l′optimisation de PCR avant fabrication de sondes marquées avec un composé fluorescent. Il n′est pas recommandé d′utiliser ce type de sonde avec le colorant SYBR Green I.

Ce dernier, un colorant fluorescent se liant à l′ADN couramment employé, se fixe sur tous les ADN double brin ; la détection est assurée par la mesure de l′augmentation de la fluorescence au cours du cycle. SYBR Green I présente des maxima d′excitation et d′émission respectifs de 494 nm et 521 nm. Les réglages instrumentaux correspondant au colorant de référence ROX donnent des résultats satisfaisants pour la mesure du colorant de référence en PCR quantitative. La spécificité de la détection par SYBR de la QPCR de Sigma est fortement améliorée par l′incorporation d′une Taq polymérase médiée par un démarrage à chaud, la JumpStart Taq.

Le volume réactionnel par défaut est de 50 μl.

20RXN est conditionné en 1 X 500 μl
100RXN est conditionné en 1 X 2,5 ml
400RXN est conditionné en 1 X 10 ml
500RXN est conditionné en 1 X 12,5 ml

L'utilisation de ce produit est protégée par un ou plusieurs des brevets américains suivants et les revendications des brevets correspondants en dehors des États-Unis : 5 994 056 et 6 171 785. L'achat de ce produit inclut une immunité limitée et non transférable contre les poursuites dans le cadre des revendications des brevets susmentionnés concernant l'utilisation de cette seule quantité de produit pour les propres recherches internes de l'acheteur. Aucun droit en vertu d′une autre revendication de brevet (telle que les revendications relatives aux appareils ou aux systèmes du brevet américain n° 6 814 934) ni aucun droit d′assurer des services commerciaux de toute nature que ce soit, notamment, mais sans caractère limitatif, la communication des résultats des activités de l'acheteur contre rémunération ou une autre considération commerciale, n'est transmis expressément, par implication, ou par préclusion. Ce produit est réservé aux activités de recherche. Les utilisations diagnostiques protégées par les brevets de Roche nécessitent l′octroi d′une autre licence par Roche. De plus amples informations sur l′achat de licences peuvent être obtenues auprès du directeur de l'attribution des licences à l′adresse Applied Biosystems, Director of Licensing, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, Californie, 94404, USA.

Eppendorf is a registered trademark of Eppendorf SE

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

JumpStart is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

SYBR is a registered trademark of Thermo Fisher Scientific or its subsidiaries